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          蛋白質組學

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          棕櫚?;鞍捉M學

          棕櫚?;鞍捉M學

          • 所屬分類:特殊蛋白質組學
          • 瀏覽次數:
          • 發布日期:2021-08-10 15:48:41
          • 產品概述
          • 案例解析

          棕櫚?;揎検且环N最普遍且可逆的蛋白質翻譯后脂質修飾的重要形式,是調控蛋白質的轉運、穩定、定位和功能的重要機制,同時,棕櫚?;揎椷€參與多種細胞生物學進程,與許多疾病的發生發展密切相關。


          技術介紹

          蛋白質棕櫚?;揎椨袨閮煞N類型:

          (1)半胱氨酸的S端通過不穩定的硫酯鍵連接到Cys,較為常見且可逆;

          (2)半胱氨酸額N端通過穩定的酰胺鍵連接到Cys和Gly,不可逆。所以棕櫚?;揎椡ǔV傅氖荢-棕櫚?;?。

          依賴ABE方法(?;?生物素基交換化學)從復雜蛋白中純化鑒定棕櫚?;鞍祝碨-?;鞍祝?。先用N-乙基馬來酰亞胺(NEM)封閉游離的硫醇,再用羥胺(HA)切斷半胱氨酸-棕櫚酰硫酯的鍵,最后用與巰基反應的生物素標記試劑標記由HA切割后新暴露的硫醇,從而鑒定出棕櫚?;揎椀牡鞍?。


          實驗流程圖



          應用方向

          基礎醫學、臨床診斷:生物標志物的篩選,發病機制,疾病治療等生物醫藥:藥物作用機理,藥效評價,藥物開發等

          農業生產:植株定向篩選,植物抗逆,作物品種優化等

          食品營養:食品組份及品質鑒定,功能性食品開發,食品安全檢測等


          棕櫚?;鞍捉M學案例解析


          棕櫚?;?a href='http://www.jillforeman.com/' target='_blank' class='key_tag'>蛋白質組學全面解析來自不同癌癥來源的、大小不同的細胞外囊泡中獨特蛋白質特征

          Comprehensive palmitoyl-proteomic analysis identifies distinct protein signatures for large and small cancer-derived extracellular vesicles


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          研究背景

          高疏水性的棕櫚?;鞍滋崛〉牡偷寐?、低純度成為研究蛋白S-?;闹卮笞璧K;大/小型細胞外囊泡(L-/S-EVs)在體內的分離及定位也是一大難點。本文采用LB-ABE手段,通過密度梯度分離出高純度EV,采用非標定量檢測鑒定棕櫚?;鞍?,比較L-/S-EVs與它們的親代細胞的棕櫚?;鞍踪|組之間的差異。


          結果速遞

          PC3中蛋白的鑒定結果通過LB-ABE法,作者將PC3的鑒定結果與SwissPalm數據庫比對,得出已知的1803種棕櫚?;鞍缀?30種未知的棕櫚?;鞍?,并對高可信度棕櫚?;鞍走M行定量、定位分析。(WCL:whole cell lysate M:membrane)


          經LB-ABE富集前后棕櫚?;鞍椎腤estern印跡結果。Western印跡證實棕櫚酰蛋白在富含棕櫚?;鞍椎牟糠郑℉yd +)中表達,但在對照組(Hyd-)中未表達,從而證實了LB-ABE后的特異性恢復。其中,已知被高度棕櫚?;腟rc家族酪氨酸激酶和Cav-1在所有餾分中都具有較高的可信度;HSPA5蛋白是L-EVs和S-EVs中共有的高豐度蛋白的代表,結果發現它在L-EV和S-EVs中均以棕櫚?;鞍仔问较嗤?。


          L-EVs和S-EVs與原始細胞之間的差異 細胞外囊泡不僅包含在原始細胞中高表達的蛋白質, 而且還含有細胞中低豐度的大量蛋白。游離的EVs包含有不同的蛋白質,為了確定這些蛋白在棕櫚?;鞍踪|組中的表達及含量, 作者將L-EVs和S-EVs與原始細胞進行了比較。由于棕櫚?;悄ぐ邢蛐揎?,而EVs是膜囊封的顆粒,因此選用L-EVs和S-EVs和M部分中鑒定出的棕櫚?;鞍走M行差異性分析。


          本文通過人前列腺細胞中棕櫚?;鞍椎亩糠治黾捌湓趤喖毎械亩ㄎ槐磉_,為前列腺癌癥的研究起到了推動作用,棕櫚?;鞍踪|組學也可以更好地檢測疾病的生物標志物。


          參考文獻

          Mariscal J, Vagner T, Kim M, et al.. Comprehensive palmitoyl-proteomic analysis identifies distinct protein signatures for large and small cancer-derived extracellular vesicles. J Extracell Vesicles.2020 Jun 10;9(1):1764192. doi: 10.1080/20013078.2020.1764192.

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